小鼠胚胎细胞步骤如下:
1)弃去培养液,用PBS洗1-2次。
2)向瓶内加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆,迅速拿回操作台,吸取胰蛋白酶,加含有6ml 含10%血清的培养液,轻轻吹打细胞。
3)加入等量的的培养液,轻轻吹打混匀后吸出一半,分到新的培养
4)传代比例:1:2-1:3
小鼠胚胎细胞常见问题及解决方案
1)培养瓶有破裂,培养液有漏液:细胞极大可能会污染,所以我们会及时安排帮老师解决。
2)细胞漂浮:培养瓶不开封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余漂浮的细胞可以去掉,留10ml培养液培养观察,细胞生长至汇合度80%,进行消化传代;如细胞还是不贴壁,将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养液继续培养,中间注意观察,我们的技术人员会一直跟踪指导,直到问题解决。
传代方法:收到细胞后,在倒置显微镜下观察细胞生长状态:如果没长满,将培养瓶用75%酒精xd后在超净台内更换新鲜培养液,继续培养,如果细胞已经长满(约80%-90%)则传代后继续培养。
小鼠胚胎细胞技术相关问答:
1. 如何选用特殊细胞系培养基?
培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之,{sx}MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。
2. 何时须更换培养基?
视细胞生长密度而定, 或遵照细胞株基本数据上之更换时间,按时更换培养基即可。
3. 可否使用与原先培养条件不同之培养基?
不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基, 若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基, 细胞大都无法立即适应, 造成细胞无法存活。
4.可否使用与原先培养条件不同之血清种类?
不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清, 在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。
上海笃玛生物相关促销产品信息
小鼠胚胎细胞
|
DMEM+10% Calf serum
|
贴壁
|
成纤维细胞
|
大鼠肺泡巨噬细胞
|
F-12K+20% FBS
|
贴壁和悬浮混合
|
巨噬细胞
|
正常大鼠肾细胞
|
DMEM+10% FBS
|
贴壁
|
上皮细胞样
|
大鼠肾小管导管上皮细胞
|
DMEM+5% FBS
|
贴壁
|
上皮细胞样
|
负鼠肾小管细胞
|
MEM+10% FBS
|
贴壁
|
上皮细胞样
|
小鼠骨髓基质细胞
|
MEMα-+20% FBS
|
贴壁
|
成纤维细胞样
|
人肾癌细胞
|
RPMI-1640+10% FBS
|
贴壁
|
上皮细胞样
|
人卵巢癌细胞
|
DMEM+10% FBS
|
贴壁
|
上皮细胞样
|
小鼠畸胎瘤细胞
|
MEMα-+7.5% BCS+2.5% FBS
|
贴壁
|
上皮细胞样
|
小鼠淋巴样瘤细胞
|
RPMI-1640+10% horse serum
|
悬浮
|
淋巴母细胞
|
小鼠骨髓瘤细胞
|
DMEM+10% FBS
|
悬浮
|
淋巴母细胞
|
小鼠肥大细胞瘤细胞
|
DMEM+10% FBS
|
半悬浮
|
肥大细胞
|
小鼠成纤维细胞
|
DMEM+10% FBS
|
贴壁
|
成纤维细胞
|
人胰腺癌细胞
|
DMEM+10% FBS
|
贴壁
|
上皮细胞样
|
人前列腺癌细胞
|
F-12 +10% FBS
|
贴壁
|
上皮细胞样
|
猪髋动脉内皮细胞
|
RPMI-1640+10% FBS
|
贴壁
|
上皮细胞样
|
猪肾细胞
|
DMEM+10% FBS
|
贴壁
|
上皮细胞样
|
人肝癌细胞
|
RPMI-1640+10% FBS
|
贴壁
|
上皮细胞样
|
人Burkitt's淋巴瘤细胞
|
RPMI-1640+10% FBS
|
悬浮
|
淋巴母细胞
|
小鼠单核巨噬细胞白血病细胞
|
DMEM + 10% FBS
|
贴壁
|
不规则圆形
|
人肝胆管癌细胞
|
RPMI-1640 + 10% FBS
|
贴壁
|
上皮细胞样
|
大鼠嗜碱性细胞白血病细胞
|
MEM+15% FBS(灭活)
|
贴壁
|
成纤维细胞
|
人恶性胚胎横纹肌瘤细胞
|
DMEM+10% FBS
|
贴壁
|
纺锤形,多核
|
猴脉络膜-视网膜内皮细胞
|
RPMI-1640 + 10% FBS
|
贴壁
|
上皮细胞样
|
大鼠肝癌细胞
|
DMEM+10% FBS
|
贴壁
|
上皮细胞样
|
人结肠腺癌细胞
|
MEM+10% FBS
|
贴壁
|
上皮细胞样
|
人子宫内膜癌细胞
|
DMEM:F12+0.005mg/mL INS+10% FBS
|
贴壁
|
上皮细胞样
|