冲洗： 材料自固定液中取出后，需立即冲洗，使其中所有的固定液全部除去，以妨碍染色 有些固定液，如10%福尔马林液、Bouin氏液固定的材料，若时间较短的话可不必冲洗。但时间过长亦需冲洗 3、脱水（37度恒温箱） 所谓脱水就是利用脱水剂将组织内的水分置换出来，以利于有机溶剂的渗入，这一过程称为脱水。 脱水是否彻底，直接关系到组织是否能充分透明 脱水过度（原因是组织在纯酒精内时间过久，发生组织质地发生变化）容易造成组织发脆。造成组织发脆的原因还有加温（温度超过36℃）、脱水剂内加有丙酮、浸蜡用的石蜡
中二甲苯过多等等。一般我们总认为组织发脆跟高浓度酒精有关，而忽视了与低浓度的酒精关系，其实低浓度的酒精具有强大的穿透力，比纯酒精更容易渗透到组织块内部使之脱水，组织如果在低浓度酒精里充分脱水，在高浓度酒精里只需脱去从低浓度到高浓度之间的水份，因此，仅需短时间就可完成，如果这时不缩短纯酒精的时间，便会引起组织发脆；如果脱水时加温，使用丙酮，还可引起组织收缩，并影响免疫组织化学的标记.
空腔器官：食管、胃、肠等应先行剖开，黏膜面向上平铺于软木板上，并用大头针将标本边缘钉于木板上，再放入固定液中，黏膜面覆盖脱脂棉或纱布，或黏膜面向下浸与固定液中。
脑：整体脑组织固定时，闹底向上，先将一长缝合线穿过脑基底动脉环，然后双手捧着脑组织放入已注入固定液的容器中，再将缝合线两头轻轻向上提起，借助于水的浮力使脑组织悬浮于固定液中，然后将缝合线固定于容器壁上。脑组织固定所需时间较长，一般为10-15天，固定1周时应更换一次固定液。
眼球：眼球表面结构致密，固定液不宜渗入，固定时应先经角膜直径做一个矢状切口，切开角膜，将小纸片卷成一定厚度插入该切口，使固定液由此切口进入眼球内，以利固定。
非整体器官的小组织直接用足量固定液固定即可。
下面从原理方面简要介绍几种常用的组织化学染色技术：
1、显示琥珀酸脱氢酶（SDH）活性的硝基-BT法：
（Succinate dehydrogenase）
⑴酶的定位及生物学意义：
琥珀酸脱氢酶是线粒体标志酶，其存在于所有有氧呼吸的细胞，和线粒体内膜紧密结合。该酶不需辅酶而自身有黄素蛋白（FP,Flavoprotein）为辅基。在组化反应中常用来反映三羧酸循环的情况。
⑵原理：上述的反应{zh1}一步的原理是，硝基-BT（Nitro-blue tetrozolyum，四唑氮蓝）系异环族化合物四唑盐，当它接受氢时，本身被还原为有色沉淀产物（甲）（Formazan）。
