固定 具有凝固或沉淀组织蛋白的作用,因此能抑制酵解酶类的活动和xj的繁殖,从而呈现对组织的固定作用 (1)10%福尔马林液:1份甲醛液 + 9份蒸馏水市场上出售的甲醛液约含37-40%的甲醛,10%福尔马林液实际上仅含3.7-4.0%的甲醛 适用范围:各种组织。但是经10%福尔马林液固定的组织,细胞核染色较好,而细胞质染色较差 处理:组织块一般固定24h以上,长时间亦可,甚至可用来长期保存组织块。短时间固定的组织块不需水洗,可直接转入70%酒精脱水 (2)Bouin氏液: 苦味酸饱和水溶液(1.22%) 75ml 甲醛液 25ml 冰醋酸 5ml 适用范围:各种动物组织及植物组织的根尖,是动物组织良好的固定液 处理:固定24h,也可在此液长期保存。流水冲洗或不经水洗直接入70%酒精脱水。
bao埋:bao埋是指将浸蜡后的组织用bao埋剂(石蜡、火棉胶、树脂等)bao被成块的过程。组织bao方法最常用的是石蜡bao埋法,制成蜡块。
切片:切片是指用切片机将石蜡组织块根据实验要求的厚度切成组织薄片。玻片打底是为了防zt片,使组织切片牢附于玻片之上。常用的打底方法是多聚赖氨酸打底。
实验器材和实验试剂:
1、器材:手术器材、实验动物、广口瓶、固定液、标签纸
2、固定:固定液
甲醛固定液:1份甲醛原液+9份水,配成比例为4%的甲醛,即10%福尔马林。
4%中性甲醛的配置:40%甲醛100ml,蒸馏水900ml,磷酸二氢钠(NaH2PO4?H20)4g,磷酸氢二钠(无水)13g,使pH值达7.0.
乙醇固定液:用于固定的浓度一般为80%-95%。
3、脱水:Leica脱水机、70%、80%、90%、95%、无水乙醇。
4、透明:二甲苯(苯、甲苯、氯仿、环己酮等)
5、浸蜡:Leicabao埋机、软蜡(熔点54℃以下)、硬蜡(熔点60-62℃)。
6、切片:Leica切片机,一次性刀片,多聚赖氨酸、载玻片,水浴锅、烤箱。
脱水:即脱去组织内的水分,借着某些溶媒置换组织内水分的过程。一般经过固定的组织内常含有较多的水分,而水是不能与蜡相混合的,因此,在浸蜡之前必须脱去组织块中的水分。乙醇是最常用的脱水剂,可与水随意混合,脱水能力强,并可硬化组织。其穿透组织的速度很快,常导致组织块收缩、变脆。因而,在使用乙醇脱水的时候,应先从低浓度开始,然后再依次递增乙醇的浓度,使用不同浓度的乙醇逐步将组织块内的水分置换出来。