冲洗: 材料自固定液中取出后,需立即冲洗,使其中所有的固定液全部除去,以妨碍染色 有些固定液,如10%福尔马林液、Bouin氏液固定的材料,若时间较短的话可不必冲洗。但时间过长亦需冲洗 3、脱水(37度恒温箱) 所谓脱水就是利用脱水剂将组织内的水分置换出来,以利于有机溶剂的渗入,这一过程称为脱水。 脱水是否彻底,直接关系到组织是否能充分透明 脱水过度(原因是组织在纯酒精内时间过久,发生组织质地发生变化)容易造成组织发脆。造成组织发脆的原因还有加温(温度超过36℃)、脱水剂内加有丙酮、浸蜡用的石蜡
中二甲苯过多等等。一般我们总认为组织发脆跟高浓度酒精有关,而忽视了与低浓度的酒精关系,其实低浓度的酒精具有强大的穿透力,比纯酒精更容易渗透到组织块内部使之脱水,组织如果在低浓度酒精里充分脱水,在高浓度酒精里只需脱去从低浓度到高浓度之间的水份,因此,仅需短时间就可完成,如果这时不缩短纯酒精的时间,便会引起组织发脆;如果脱水时加温,使用丙酮,还可引起组织收缩,并影响免疫组织化学的标记.
脱水:即脱去组织内的水分,借着某些溶媒置换组织内水分的过程。一般经过固定的组织内常含有较多的水分,而水是不能与蜡相混合的,因此,在浸蜡之前必须脱去组织块中的水分。乙醇是最常用的脱水剂,可与水随意混合,脱水能力强,并可硬化组织。其穿透组织的速度很快,常导致组织块收缩、变脆。因而,在使用乙醇脱水的时候,应先从低浓度开始,然后再依次递增乙醇的浓度,使用不同浓度的乙醇逐步将组织块内的水分置换出来。
显示葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)活性的铅法:
(Glucosel-phosphate phosphohydrolase)
①酶的定位及其生物学意义:
该酶主要位于内质网,是内质网的标志酶。G-6-Pase参与糖谢,能水解葡萄糖-6-磷酸而释放出葡萄糖和磷酸。
⑵原理:G-6-Pase将底物(葡萄糖-6-磷酸钾盐)水解产生磷酸离子,后者被孵育液中的硝酸铅所捕获,最终反应物为颗粒状的硫化铅沉淀,其反应式如下:
酶Pb(NO3)2
葡萄糖-6-磷酸钾+H2O葡萄糖+磷酸
⑶结果:酶活性部位呈棕色硫化铅颗粒沉淀。在光镜下G-6-Pase活性颗粒较均匀地分布于胞质中。